培養基選擇：

LB培養基(種子培養基) :胰蛋白胨5g,酵母粉2.5g,NaCl5g,溶于500mlH2O,NaOH調節pH7.0, 2L三角瓶裝,滅菌鍋濕熱高壓滅菌121℃, 20min,室溫保存.  

TB培養基(發酵培養基) : 胰蛋白胨240g, 酵母粉480g, 甘油80g,消泡劑1ml, 溶于H2O, 定容至19L,B. Braun發酵罐在位滅菌121℃, 15min.

配制種子固體培養基：100mL，分裝試管，0.1MPa 滅菌20min，然后擺成斜面。

配制種子培養液：1200mL，分裝平均分裝于三個500mL三角瓶中，同上滅菌。

培養方式：

  大腸桿菌發酵大多采用補料分批培養，這是在現代發酵工藝得到優化的一種方式，能有效的優化微生物培養過程中的化學環境。使微生物處于最佳的生長環境。這種方式一方面可以避免某些營養成分初始濃度過高出現底物抑制現象，另一方面能夠防止限制性營養成分被耗盡而影響細胞的生長和產物的形成。補料分批培養已廣泛應用于各種各樣的初級、次級生物產品和蛋白等的發酵生產中。

    培養基營養成分過高會抑制細胞的生長，采用流加補料是提高細胞濃度和外源蛋白產量的有效方式，高密度培養通過調節限制性底物的流加速率來調控細胞生長。

培養條件：

1、溫度：36~38 ℃

2、pH： 7

3、攪拌速率：100~200r/min

4、溶氧:   20~50%

5、通風：1:2VVM

6、接種量：1~2%

操作步驟：

1、菌種準備

2、上罐前的準備及實罐滅菌

3、發酵操作

4、發酵管理

5、發酵過程中各生化指標的測定

6、補料

7、放罐

8、清洗